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　　在腫瘤免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域，組織樣本單細(xì)胞懸液制備是單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)中至關(guān)重要的工作，其質(zhì)量好壞直接影響了后續(xù)建庫(kù)的成敗以及測(cè)序數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量。因此，單細(xì)胞懸液制備除了需要有經(jīng)驗(yàn)豐富的人員來(lái)進(jìn)行指導(dǎo)/操作，還得依靠靠譜的單細(xì)胞懸液制備儀來(lái)助力。

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)備：?jiǎn)渭?xì)胞懸液制備儀 JX-CKSM-6WK

　　應(yīng)用領(lǐng)域：腫瘤研究、心血管研究、干細(xì)胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學(xué)研究

　　大鼠腫瘤組織樣品的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：

　　01組織獲取、清洗

　　1.荷瘤鼠麻醉后處死，取腫瘤組織200-500 mg，迅速置于裝有4 ℃不含血清的培養(yǎng)液或PBS的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放置冰上快速拿回實(shí)驗(yàn)室。(一小時(shí)內(nèi)分離腫瘤細(xì)胞)。

　　2.上述組織使用含有1 %雙抗的PBS洗滌三次，眼科剪去除組織塊中的脂肪、壞死組織等無(wú)用組織。

　　02酶消化、機(jī)械分離

　　1.用剪刀將組織切割成1-2 mm3左右的小塊，用4℃ D-Hank's液洗1次，盡量去除剪碎組織過(guò)程中產(chǎn)生的組織碎片。

　　2.樣品管內(nèi)加入200-500 mg組織及消化酶，放入單細(xì)胞懸液儀，選擇內(nèi)置程序運(yùn)行。

　　3.消化完成后，適當(dāng)震蕩樣品管，觀察渾濁度與顏色，并用細(xì)胞篩過(guò)濾出單細(xì)胞懸液，隨后加入消化終止液，最終得到細(xì)胞懸液。

　　03洗滌和重懸（選擇性去紅）

　　1.如有大量紅細(xì)胞污染，加入紅細(xì)胞裂解液（自備）裂紅，230-250 g離心后加入PBS重懸，隨即230-250 g離心洗滌并培養(yǎng)基重懸。

　　2.結(jié)果：?jiǎn)渭?xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保持95 %以上活率（PI染色流式或臺(tái)盼藍(lán)染色鏡檢），總數(shù)目在3×107左右。

　　實(shí)驗(yàn)操作流程圖：

　　大鼠腫瘤組織樣品處理的實(shí)驗(yàn)前后對(duì)比效果圖：

　　實(shí)驗(yàn)解決的問(wèn)題：

　　從組織獲得存活單細(xì)胞是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，處理當(dāng)中常存在處理時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞處于逆境狀態(tài)時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞得率低、細(xì)胞存活率低、操作繁瑣等問(wèn)題。使用JX-CKSM-WK系列單細(xì)胞懸液制備儀，具有起始組織量小，時(shí)間短，細(xì)胞得率高，細(xì)胞活性高的特點(diǎn)；常應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測(cè)序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。