制備原代組織樣品的單細胞懸浮液,可應(yīng)用全自動溫和組織處理系統(tǒng),不但可以有效的防止細胞的過度損耗,還能使標記靶細胞達到較大值,優(yōu)化細胞的分選;收集組織細胞標本,還可制成細胞懸液以供下游分離。
通常細胞的培養(yǎng)會被分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)兩種,又因為細胞的增殖有可能會形成不同大小的細胞塊狀或片狀結(jié)構(gòu)。若一塊中有兩個或更多的細胞粘連在一起或細胞碎片過多,都會影響FCM的結(jié)果,從而導(dǎo)致實驗的失敗。因此,合格的培養(yǎng)單細胞懸液制備是非常重要的,進而就應(yīng)用到了全自動溫和組織處理器。
培養(yǎng)樣品單細胞懸液分離的制備方案
1、應(yīng)用百分之0.04的乙二胺四乙酸二鈉鹽或是百分之0.29的胰蛋白酶進行消化3~7分鐘,時間主要是取決于室溫的狀況,直到光鏡下壁的細胞間出現(xiàn)篩狀的間隙,然后放棄消化液,加入PBS液體。
2、使用一根吸管將其細胞從瓶壁中輕輕吹出,然后移入離心管內(nèi)。
3、進行低速的短期離心,即800~1000r/min,5分鐘即可。
4、棄上清,加pH7.4的PBS溶液,短時低速離心,重復(fù)進行2~3次,去除細胞懸液中的細胞碎片。
5、加入少量的PBS液體,輕吹均勻沉淀池。增加固定液或低溫保存,等待下次應(yīng)用。
因此在做細胞培養(yǎng)制備時,還需全自動溫和組織處理系統(tǒng)的應(yīng)用,可更好更完善的分離細胞懸浮液,獲得自己所需的制備樣品。